材料和试剂

鼠粪
生理盐水（约5-10ml /小鼠，取决于粪便的量）（例如，Sigma-Aldrich）
氯仿在甲醇（2:1体积）（约5-10ml /小鼠）中

设备

镊子适合捡鼠标
筛子，足够粗，可以抓住鼠标粪便
可选：面粉筛
50毫升和15毫升锥形聚丙烯管（每只小鼠一只）
15ml玻璃管（每只小鼠一只）
管架
分析天平
化学通风橱
Potter-Elvehjem组织研磨机和钻机
用转子离心以保持15ml管（例如，具有GH-3.8摇臂转子或类似物的Beckman Coulter GS-6）
22G1½皮下注射针（每只小鼠两只）
5 ml注射器（每只小鼠一只）

程序

收集小鼠粪便
1. 更换所有鼠标笼子的床上用品。最好是使用床上用品由小颗粒组成的材料; 你可能想问你当地动物设施可供选择。
2. 每天喂食小鼠（每笼一只），随意喂食数天（例如，3-4天）。
3. 将鼠标放在新的笼子里。
4. 在老笼子里的床上用一个粗筛子，把粪便和其他大颗粒运走。
5. 或者，将粪便和其他颗粒运到面粉筛上
6. 使用镊子，拿起所有的粪便从一个老鼠，并把它在用小鼠标号标记的50-ml锥形管中。重复对所有小鼠
7. 获得每只鼠的总粪便重量。
8. 每只小鼠称量正好1,000mg的粪便，并使用组织研磨机将其粉碎。
准备玻璃管
1. 用相应的鼠标标记每个玻璃管。
2. 在分析天平上称量管; 记录管的编号和重量。
提取脂质
1. 在15ml管中加入5ml生理盐水至1000mg粉末化的粪便中并涡旋
2. 加入5ml氯仿：甲醇混合物并涡旋
3. 将悬浮液以1,000×g离心（约2,000rpm，上述转子）在室温下10分钟。后来你将看到由固相分离的两个液相（图1） 1）; 在底部可能存在另一个小的固相。较低液相含有提取的脂质在氯仿：甲醇中
4. 将塑料管保持在玻璃管上方，小心插入22G½ 针穿过管壁进入两个液相的下部; 然后，取下针。警告：潜在危险：插入时针头插入塑料管，确保轻轻应用，恒定压力。扭转针可便于插入。不要保留你的手指在管的对面墙！
5. 附加空气填充注射器到另一个22G½针; 小心插入针在两个液相的下部的顶部，刚好在固体下面阶段（视频1）。
  
  视频1.从塑料中去除脂质相。视频显示如何将针插入聚丙烯管中并从管中排出脂质相。
6. 将管子保持在带有标记的玻璃管上方小鼠的数量并仔细注入空气; 下层液相会从塑料管中排出并收集到玻璃管中。
蒸发
1. 将玻璃管放在通风橱下的支架中。
2. 将管子单独放置3-4天，直到所有液体蒸发
3. 称量分析天平上的试管。
4. 从新管重量中减去空管重量，以获得每1,000mg粪便的脂质质量
5. 将脂质质量乘以粪便的总重量（克）除以粪便被收集的天数获得小鼠每天的平均粪便脂质排泄
  
  图1。离心后溶解的粪便的两个样品。图显示三层离心后粪便悬浮氯仿：甲醇。相'1'是水相。阶段'2'包含不溶物。相'3'包含提取的脂质。

笔记

在作者的手中，用标准食物（LabDiet Formulab 5008）喂养的12周龄雄性C57BL/6小鼠每天排泄5.8±0.5 [SD]克粪便和8.6±4mg粪便脂质（粪便中的脂质含量，6‰。在高脂肪饮食（Harlan Teklad TD 93075）中，他们每天排泄2.5±0.4克粪便和10.0±1.4毫克粪便脂质（粪便中的脂质含量，19‰）。

致谢

该方案（Kraus等人，2014）基于Folch等人（1957）报道的方法。这项工作得到德国心脏病协会（KR 3475/1-1）和美国心脏协会（09POST2250499）DK的资助，NIH的捐赠（KO8 DK090149，R01 DK100385，BNORC P30 DK046200和NORCH P30 DK040561）到QY，和来自NIH（R37 DK43051，P30 DK57521）的拨款以及来自JPB基金会给BBK的拨款

参考文献

Folch，J.，Lees，M。和Sloane Stanley，G.H。（1957）。从动物组织中分离和纯化总脂质的简单方法 J Biol Chem 226（1）：497-509。
Kraus，D.，Yang，Q.，Kong，D.，Banks，AS，Zhang，L.，Rodgers，JT，Pirinen，E.，Pulinilkunnil，TC，Gong，F.，Wang，YC，Cen，，Sauve，AA，Asara，JM，Peroni，OD，Monia，BP，Bhanot，S.，Alhonen，L.，Puigserver，P.and Kahn，BB（2014）。烟酰胺N-甲基转移酶基因敲低可防止饮食诱导的肥胖。 /em> 508（7495）：258-262。