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[Bio101] Protein Precipitation from Detergent-containing Samples
[Bio101] 从包含去垢剂的样品中分离蛋白质   

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本文章节

Abstract

Materials and Reagents

  1. Methanol
  2. Chloroform

Equipment

  1. Centrifuge

Procedure

For 100 μl of sample:

  1. Add 300 μl of methanol to the protein sample and mix.
  2. Add 100 μl of chloroform and mix. Mixing yields a single phase.
  3. Add 200 μl of water and mix vigorously. Initiation of phase separation.
  4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 min. Precipitated proteins are at the interface.
  5. Remove upper aqueous methanol phase.
  6. Add 300 μl of methanol to the bottom phase and mix. Mixing yields a single phase.
  7. Centrifuge at 10,000 x g for 1 min.
  8. Air-dry the protein pellet with the tube inverted.

References

  1. Whitelegge J.P., le Coutre J., Lee J.C., Engel C.K., Prive G.G., Faull K.F., Kaback H.R. (1999). Toward the bilayer proteome, electrospray ionization-mass spectrometry of large, intact transmembrane proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 96(19): 10695-8.

简介

材料和试剂

  1. 甲醇
  2. 氯仿

设备

  1. 离心机

程序

对于100μl样品:

  1. 向蛋白质样品中加入300μl甲醇并混合
  2. 加入100μl氯仿并混合。 混合产生单相。
  3. 加入200μl水并剧烈混合。 相分离开始。
  4. 在10,000×g离心2分钟。 沉淀的蛋白质在界面
  5. 除去上层甲醇相。
  6. 加入300μl甲醇到底部相并混合。 混合产生单相。
  7. 以10,000×g离心1分钟。
  8. 用倒置的管子空气干燥蛋白质沉淀。

参考文献

  1. Whitelegge J.P.,le Coutre J.,Lee J.C.,Engel C.K.,Prive G.G.,Faull K.F.,Kaback H.R.(1999)。 面向双层蛋白质组,电喷雾电离 - 大,完整的跨膜蛋白质的质谱。 美国国家科学院院报 96(19):10695-8。
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Copyright: © 2011 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用:Aboulaich, N. (2011). Protein Precipitation from Detergent-containing Samples. Bio-protocol Bio101: e40. DOI: 10.21769/BioProtoc.40;
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