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[Bio101] Protein Precipitation from Detergent-containing Samples
[Bio101] 从包含去垢剂的样品中分离蛋白质

生物化学 > 蛋白质 > 分离和纯化
作者: Nabila Aboulaich
3/5/2011, 5642 views, 0 Q&A
DOI: https://doi.org/10.21769/BioProtoc.40

[Abstract]

[Abstract]

Materials and Reagents

  1. Methanol
  2. Chloroform

Equipment

  1. Centrifuge

Procedure

For 100 μl of sample:

  1. Add 300 μl of methanol to the protein sample and mix.
  2. Add 100 μl of chloroform and mix. Mixing yields a single phase.
  3. Add 200 μl of water and mix vigorously. Initiation of phase separation.
  4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 min. Precipitated proteins are at the interface.
  5. Remove upper aqueous methanol phase.
  6. Add 300 μl of methanol to the bottom phase and mix. Mixing yields a single phase.
  7. Centrifuge at 10,000 x g for 1 min.
  8. Air-dry the protein pellet with the tube inverted.

References

  1. Whitelegge J.P., le Coutre J., Lee J.C., Engel C.K., Prive G.G., Faull K.F., Kaback H.R. (1999). Toward the bilayer proteome, electrospray ionization-mass spectrometry of large, intact transmembrane proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 96(19): 10695-8.

材料与试剂

1.     甲醇

2.     氯仿

 

仪器设备

1.     离心机

 

实验步骤

100 ul样品为例

1.     向样品中加入300 ul甲醇,混匀。

2.     向样品中加入100ul氯仿,混匀。混合物应只有单一相。

3.     加入200ul水,用力混匀。使混合物产生液相分离。

4.     10.000 x g离心2分钟。沉淀的蛋白产生在分界面。

5.     吸走上面的甲醇液态相。

6.     向下面的溶液加入300ul甲醇,混匀。混合物应只有单一相。

7.     10.000 x g离心1分钟。

8.     倒转离心管,风干蛋白沉淀。

 

参考文献

1.        Whitelegge J.P., le Coutre J., Lee J.C., Engel C.K., Prive G.G., Faull K.F., Kaback H.R. (1999). Toward the bilayer proteome, electrospray ionization-mass spectrometry of large, intact transmembrane proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 96(19): 10695-8. 

 

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How to cite this protocol: Aboulaich, N. (2011). Protein Precipitation from Detergent-containing Samples. Bio-protocol Bio101: e40. DOI: 10.21769/BioProtoc.40; Full Text



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