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[Bio101] Lentivirus Infection
[Bio101] 慢病毒感染方法

分子生物学 > DNA > 转染
作者: Nabila Aboulaich
2/20/2011, 17289 views, 0 Q&A
DOI: https://doi.org/10.21769/BioProtoc.37

[Abstract]

[Abstract]

Materials and Reagents

 

1.        6 cm tissue culture plates (Fiosher).

2.        Human or mouse cell line and appropriate growth media Reagents required for cell-based assay.

3.        Polybrene (Hexadimethrine bromide; Sigma H 9268 )

4.        Appropriated antibiotics for selection purpose.

 

Equipment

 

1.        Tissue Culture Incubator

 

Procedure

 

Note: Lentiviral infections should be optimized for each cell line and cell-based assay. For example, the following parameters should be tested before starting large-scale infections to determine the optimal conditions for a given experiment:

1)       Cell seeding density.

2)       Amount of lentivirus.

3)       Puromycin concentration.

4)       Timecourse.

1.        Seed cells at appropriate density in 6 mL in 6 cm plates.

1)       Adherent cells: seed 1 day prior to infection.

2)       Suspension cells: seed day of infection in media containing polybrene.

2.        Add virus to cells:

1)         (Adherent cells): Remove growth media and add fresh media containing polybrene. Alternatively, remove a portion of the growth media and supplement with media containing polybrene. Adjust volumes and polybrene concentration to achieve the correct final polybrene concentration (8ug/ml).

3.        Viral infection:

1)       Incubate cells overnight.

2)       Change media 24 hours post-infection. Remove media and replace with 6 mL fresh growth media. If antibiotics selection is desired, use fresh growth media containing antibiotics. Note: Puromycin concentration should be optimized     for each cell line; typical concentrations range from 2-5 μg/mL.

4.        Incubate cells, replacing growth media (with antibiotics, if desired) as needed every few days. Incubation periods are highly dependent on the post-infection assay.

Note: All lentiviral procedures should be carried out in accordance with biosafety requirements of the host institution.

 

 

 

材料和试剂

1.     6 cm细胞培养皿(Fiosher).

2.     人类或小鼠细胞系,细胞试验所需要的生长培养基。

3.     凝聚胺(海美溴铵; Sigma H 9268)

4.     合适的选择性抗生素。

 

仪器

1.     细胞培养箱

 

步骤

慢病毒感染方法应该根据不同的细胞系和以细胞为基础的试验来进行优化。例如,下列的参数应该在大规模的感染之前进行优化,以确定一个实验的最适条件:

1)     细胞种植密度

2)     慢病毒的数量

3)     嘌呤霉素的浓度

4)     感染时间

2.     6cm培养皿中种植适当密度的细胞,每孔体积6ml

1)     贴壁细胞:转染前1天种植细胞

2)     悬浮细胞:转染当天种植细胞,培养基中需要含有凝聚胺。

3.     细胞中加入病毒:

1)     (贴壁细胞):弃掉培养基,加入新鲜的含有凝聚胺的培养基 。或者,弃掉部分培养基并且补充含有凝聚胺的培养基。调整体积和凝聚胺的浓度,使得凝聚胺的终浓度为8ug/ml

4.     病毒感染:

1)     孵育细胞过夜。

2)     感染后24h更换培养基。弃掉培养基,换入6ml新鲜的培养基。如果需要抗生素选择,则使用含有抗生素的新鲜培养基。

注意:嘌呤霉素的浓度应该根据每种细胞系来进行优化;常用的浓度范围为: 2-5 μg/mL.

5.     孵育细胞,根据需要每隔几天更换培养基(如果需要,则要含有抗生素) 。孵育时间的长短主要依赖于感染后的试验。

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How to cite this protocol: Aboulaich, N. (2011). Lentivirus Infection. Bio-protocol Bio101: e37. DOI: 10.21769/BioProtoc.37; Full Text



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