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[Bio101] Lentivirus Infection
[Bio101] 慢病毒感染方法   

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本文章节

Abstract

Materials and Reagents

  1. Cells
  2. Polybrene (hexadimethrine bromide) (Sigma-Aldrich, catalog number: H9268 )
  3. Puromycin
  4. Human or mouse cell line and appropriate growth media reagents required for cell-based assay
  5. Polybrene appropriated antibiotics for selection purpose

Equipment

  1. Tissue culture Incubator
  2. 6 cm tissue culture plates (Thermo Fisher Scientific)

Procedure

Note: Lentiviral infections should be optimized for each cell line and cell-based assay. For example, the following parameters should be tested before starting large-scale infections to determine the optimal conditions for a given experiment:

  1. Cell seeding density.
  2. Amount of lentivirus.
  3. Puromycin concentration.
  4. Timecourse
  1. Seed cells at appropriate density in 6 ml in 6 cm plates.
    1. Adherent cells: seed 1 day prior to infection.
    2. Suspension cells: seed day of infection in media containing polybrene.
  2. Add virus to cells:
    1. (Adherent cells): Remove growth media and add fresh media containing polybrene. Alternatively, remove a portion of the growth media and supplement with media containing polybrene. Adjust volumes and polybrene concentration to achieve the correct final polybrene concentration (8 μg/ml).
  3. Viral infection:
    1. Incubate cells overnight.
    2. Change media 24 h post-infection. Remove media and replace with 6 ml fresh growth media. If antibiotics selection is desired, use fresh growth media containing antibiotics.
      Note: Puromycin concentration should be optimized for each cell line; typical concentrations range from 2-5 μg/ml.
  4. Incubate cells, replacing growth media (with antibiotics, if desired) as needed every few days. Incubation periods are highly dependent on the post-infection assay.
    Note: All lentiviral procedures should be carried out in accordance with biosafety requirements of the host institution.

简介

材料和试剂

  1. 细胞
  2. 聚凝胺(溴化己二胺)(Sigma-Aldrich,目录号:H9268)
  3. 嘌呤霉素
  4. 人或小鼠细胞系和基于细胞的测定所需的合适的生长培养基试剂
  5. Polybrene为选择目的使用抗生素

设备

  1. 组织培养培养箱
  2. 6厘米的组织培养板(Thermo Fisher Scientific)

程序

注意:对于每种细胞系和基于细胞的测定,应优化慢病毒感染。例如,在开始大规模感染以确定给定实验的最佳条件之前,应测试以下参数:

  1. 细胞播种密度
  2. 慢病毒的数量
  3. 霉素浓度
  4. 时间过程
  1. 在6厘米平板上6毫升适当密度的种子细胞。
    1. 粘附细胞:感染前1天种子。
    2. 悬浮细胞:在含有聚凝胺的培养基中感染的种子日。
  2. 将病毒添加到单元格:
    1. (贴壁细胞):去除生长培养基并加入含有聚凝胺的新鲜培养基。或者,除去一部分生长培养基并补充含有聚凝胺的培养基。调节体积和聚凝胺浓度,以达到正确的最终聚凝胺浓度(8μg/ ml)。
  3. 病毒感染:
    1. 孵育细胞过夜。
    2. 感染后24小时更换培养基。 取出培养基,并用6 ml新鲜生长培养基更换。 如果需要选择抗生素,请使用含有抗生素的新鲜生长培养基。
      注意:应优化每种细胞系的嘌呤霉素浓度; 典型浓度范围为2-5μg/ ml。
  4. 孵育细胞,每隔几天根据需要替代生长培养基(如果需要,用抗生素)。 孵化期高度依赖于感染后检测。
    注意:所有慢病毒程序应按照主办机构的生物安全要求进行。
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Copyright: © 2011 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用:Aboulaich, N. (2011). Lentivirus Infection. Bio-protocol Bio101: e37. DOI: 10.21769/BioProtoc.37;
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