搜索

[Bio101] Silver Staining
[Bio101] 银染   

下载 PDF 引用 收藏 提问与回复 分享您的反馈

本文章节

Abstract

1.Add fixation solution on gel and incubate overnight or minimum 2 h with gentle shaking.
2.Wash gel with gentle shaking with 30% ethanol 3 X 10 min.
3.Wash gel with dest. water 2 X 10 min.
4.Incubate gel with sensitizer solution for 1 min.
5.Wash gel with dest. water 2 X 1 min.

Materials and Reagents

  1. 99.5 % ethanol (Sigma)
  2. 100% acetic acid (Sigma)
  3. Sodium dithionite (Sigma)
  4. Silver nitrate (Sigma)
  5. Formaldehyde solution (37 %) (Sigma)
  6. Sodium carbonate (Sigma)
  7. Sodium thiosulphate (Sigma)
  8. EDTA (Sigma)

Equipment

  1. Shaker

Procedure

  1. Add fixation solution on gel and incubate overnight or minimum 2 h with gentle shaking.
  2. Wash gel with gentle shaking with 30% ethanol 3 X 10 min.
  3. Wash gel with dest. water 2 X 10 min.
  4. Incubate gel with sensitizer solution for 1 min.
  5. Wash gel with dest. water 2 X 1min.
  6. Incubate gel with staining solution for 25 min.
  7. Wash gel with dest. water for 1 min.
  8. Add developer solution (about 2-3 min) with gentle mixing.
  9. Add stop solution before the protein bands get too dark stained.

Recipes

  1. Fixation solution: 30% ethanol: 10% acetic acid (160 ml : 50 ml : 290 ml H2O).
  2. 30% ethanol.
  3. Sensitizer solution: sodium dithionite 25 mg/100 ml (sensitizer, always make it fresh)
  4. Staining solution: 0.2% AgNO3 (400 μl/40 ml from 20% AgNO3 stock solution from the freezer).Careful, it is strong oxidizer and blackens everything) + 3 μl/40 ml Formaldehyde solution (36-38%, must be fresh).
  5. Developer solutiuon: 6% sodium carbonate (3 g/50 ml), 4 μg/ml sodium thiosulfate (Na2S2O3, 50 μl of stock solution 4 mg/ml, can be stored a few weeks in the fridge) + formaldehyde 25 μl/50 ml. Always make developer fresh.
    Do not use more formaldehyde then in therecipe, it might produce background. For better result, use fresh stock solution of Na2S2O3(4 mg/ml).

简介

1.在凝胶上加入固定溶液,孵育过夜或轻轻摇动至少2小时。
2.用30%乙醇轻轻摇动3次,每次10分钟,洗涤凝胶。 水2×10分钟。
4.用敏化剂溶液保温凝胶1分钟。
5.用灭菌水洗涤凝胶。 水2×1分钟。

材料和试剂

  1. 99.5%乙醇(Sigma)
  2. 100%乙酸(Sigma)
  3. 连二亚硫酸钠(Sigma)
  4. 硝酸银(Sigma)
  5. 甲醛溶液(37%)(Sigma)
  6. 碳酸钠(Sigma)
  7. 硫代硫酸钠(Sigma)
  8. EDTA(Sigma)

设备

  1. 摇床

程序

  1. 在凝胶上添加固定溶液,孵育过夜或最少2小时,轻轻摇动
  2. 用30%乙醇轻轻摇动3×10分钟洗涤凝胶
  3. 用dest洗涤凝胶。 水2×10分钟
  4. 孵育凝胶与敏化溶液1分钟。
  5. 用dest洗涤凝胶。 水2×1min。
  6. 用染色溶液孵育凝胶25分钟
  7. 用dest洗涤凝胶。 水1分钟。
  8. 在温和混合下加入显色剂溶液(约2-3分钟)
  9. 在蛋白质条带变得太深的染色前加入终止液。

食谱

  1. 固定溶液:30%乙醇:10%乙酸(160ml:50ml:290ml H 2 O)。
  2. 30%乙醇
  3. 敏化剂溶液:连二亚硫酸钠25 mg/100 ml(敏化剂,总是新鲜)
  4. 染色溶液:0.2%AgNO 3(400μl/40ml,来自冷冻机的20%AgNO 3储备溶液)。小心,它是强氧化剂并使一切变黑) 3μl/40 ml甲醛溶液(36-38%,必须是新鲜的)
  5. 显影剂溶液:6%碳酸钠(3g/50ml),4μg/ml硫代硫酸钠(Na 2 S 2 O 3) 50μl储备液4 mg/ml,可储存几周在冰箱中)+甲醛25μl/50 ml。 始终让开发者更新。
    不要使用更多的甲醛,然后在incipe,它可能产生背景。 为了获得更好的结果,使用新鲜的Na 2 S 2 O 3(4mg/ml)储备溶液。
  • English
  • 中文翻译
免责声明 × 为了向广大用户提供经翻译的内容,www.bio-protocol.org 采用人工翻译与计算机翻译结合的技术翻译了本文章。基于计算机的翻译质量再高,也不及 100% 的人工翻译的质量。为此,我们始终建议用户参考原始英文版本。 Bio-protocol., LLC对翻译版本的准确性不承担任何责任。
Copyright: © 2011 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用:Aboulaich, N. (2011). Silver Staining. Bio-protocol Bio101: e26. DOI: 10.21769/BioProtoc.26;
提问与回复

(提问前,请先登录)bio-protocol作为媒介平台,会将您的问题转发给作者,并将作者的回复发送至您的邮箱(在bio-protocol注册时所用的邮箱)。为了作者与用户间沟通流畅(作者能准确理解您所遇到的问题并给与正确的建议),我们鼓励用户用图片或者视频的形式来说明遇到的问题。由于本平台用Youtube储存、播放视频,作者需要google 账户来上传视频。

当遇到任务问题时,强烈推荐您提交相关数据(如截屏或视频)。由于Bio-protocol使用Youtube存储、播放视频,如需上传视频,您可能需要一个谷歌账号。