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[Bio101] Alarmablue Assay for Detecting Cell Viability
[Bio101] Alarmablue 法检测细胞活力   

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Abstract

AlamarBlueTM detects cell viability by utilizing a nonfluorescent dye resazurin, which is converted to a fluorescent dye resorufin in response to chemical reduction of growth medium resulting from cell growth. The fluorescent or colorimetric signal generated from the assay is proportional to the number of living cells in the sample (detailed information can be found from here).

Materials and Reagents

  1. Resazurin cell viability assay kit (Biotium, catalog number: 30025 )
  2. Cells: in this protocol, three human prostate cancer cell lines are tested.
    1. DU 145 (ATCC, catalog number: HTB-81 ™)
    2. PC3 (ATCC, catalog number: CRL-1435 ™)
    3. LNCap (ATCC, catalog number: CRL-1740 ™)

Equipment

  1. Spectra PLUS microplate reader
  2. 96-well tissue culture plates

Procedure

  1. Standard curve:
    1. Plate cells in 100 μl medium into 96-well tissue culture plates by conducting cell number titration in the range of 40 to 10,000 for adherent cells and 2,000 to 500,000 for suspension cells. For background control, use 100 μl medium without cells.
    2. Add 10 μl resazurin solution into medium and incubate cells at 37 °C overnight (between 1 to 24 h).
    3. Measure absorbance at 570 nm and 600 nm using a micro-titer plate reader.
    4. Obtain OD570-OD600 for each sample and plot a standard curve to identify the optimal cell concentration for your assay.

  2. Cell viability assay:
  1. Plate cells into 96-well tissue culture plates using optimal cell concentration. For human prostate cancer cells DU145, PC3 and LNcap, 2,000 and 5,000 cells/well are used.
  2. Carry out your experiment by adding agents of your interest into appropriate well and incubate with cells for a certain period of time. 
  3. Add 10 μl resazurin solution into medium and incubate cells at 37 °C overnight (between 1 to 24 h).
  4. Measure absorbance at 570 nm and 600 nm using a micro-titer plate reader.
  5. Obtain OD570-OD600 for each sample and divide the OD value of test samples by that of control samples. Set control samples as 100% viable and calculate the cell viability.
    Cell viability = (OD of test samples)/ (OD of control samples) x 100%

References

  1. Nociari, M. M., Shalev, A., Benias, P. and Russo, C. (1998). A novel one-step, highly sensitive fluorometric assay to evaluate cell-mediated cytotoxicity. J Immunol Methods 213(2): 157-167.

简介

AlamarBlueTM通过利用非荧光染料刃天青检测细胞存活力,其响应于由细胞生长产生的生长培养基的化学还原转化为荧光染料试卤灵。 从测定产生的荧光或比色信号与样品中的活细胞数量成比例(详细信息可从这里找到)。

材料和试剂

  1. 刃天青细胞活力测定试剂盒(Biotium,目录号:30025)
  2. 细胞:在该方案中,测试三种人前列腺癌细胞系。
    1. DU 145(ATCC,目录号:HTB-81 TM)
    2. PC3(ATCC,目录号:CRL-1435 TM)
    3. LNCap(ATCC,目录号:CRL-1740 TM)

设备

  1. Spectra PLUS酶标仪
  2. 96孔组织培养板

程序

  1. 标准曲线:
    1. 通过对粘附细胞进行40至10,000的细胞数滴定,并对悬浮细胞进行2,000至500,000的细胞数滴定,将100μl培养基中的平板细胞置于96孔组织培养板中。 对于背景控制,使用100微升没有细胞的培养基。
    2. 加入10μl刃天青溶液到培养基中,并在37℃下孵育细胞过夜(1至24小时)。
    3. 使用微量滴定板读数器测量在570nm和600nm的吸光度。
    4. 对于每个样品获得OD <570> 600,绘制标准曲线以确定测定的最佳细胞浓度。

  2. 细胞活力测定:
  1. 使用最佳细胞浓度将细胞平板接种到96孔组织培养板中。 对于人前列腺癌细胞DU145,PC3和LNcap,使用2,000和5,000个细胞/孔。
  2. 通过将您感兴趣的试剂加入适当的孔中并与细胞孵育一段时间来进行实验。
  3. 加入10μl刃天青溶液到培养基中,并在37℃下孵育细胞过夜(1至24小时)。
  4. 使用微量滴定板读数器测量在570nm和600nm的吸光度。
  5. 对于每个样品获得OD <570> <600>,并将测试样品的OD值除以对照样品的OD值。 将对照样品设置为100%存活并计算细胞活力 细胞活力=(测试样品的OD)/(对照样品的OD)×100%

参考文献

  1. Nociari,MM,Shalev,A.,Benias,P.and Russo,C.(1998)。 a novel one-step,highly sensitive fluorometric assay to evaluate cell-mediated cytotoxicity。 J Immunol Methods 213(2):157-167。
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Copyright: © 2011 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用:Zhang, H. (2011). Alarmablue Assay for Detecting Cell Viability. Bio-protocol Bio101: e118. DOI: 10.21769/BioProtoc.118;
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